fa کلون و بیان ژن fliC به‌عنوان کاندیدای واکسن علیه بیماری تیفوئید میکروبیولوژی میکروبیولوژی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research <p dir="RTL"><strong>پیش‌زمینه و هدف: </strong><a name="OLE_LINK6"></a><a name="OLE_LINK5">سالمونلا انتریکا یک پاتوژن زئونوز است که می‌تواند باعث تب تیفوئید در انسان و حیوان شود. این باکتری یکی از علل مهم عفونت‌های ناشی از مواد غذایی در انسان در سراسر جهان است. از مطالعات اخیر تخمین زده می‌شود که سالانه حدود 22 میلیون مورد ابتلا به این بیماری گزارش می‌شود که از این تعداد 200 هزار نفر را به کام مرگ می‌کشاند. فلاژلینی که توسط </a><span dir="LTR">fliC</span> کد می‌شود نقش مهمی در بیماری‌زایی دارد و می‌تواند به‌عنوان آنتی‌ژنی قوی در واکسن مورداستفاده قرار گیرد. این مطالعه باهدف تولید پروتئین نوترکیب <span dir="LTR">fliC</span> به‌عنوان یکی از کاندیداهای واکسن علیه بیماری سالمونلوز انجام شد.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش‌ کار</strong>: توالی پروتئین <span dir="LTR">fliC</span> از پایگاه داده <span dir="LTR">NCBI</span> اخذ شد. برای بیان حداکثری، ژن موردنظر با توجه به ترجیح کدونی <em><span dir="LTR">E. coli</span></em> ساخته شد. ژن سنتتیک از وکتور <span dir="LTR">pUC57</span> به وکتور بیانی <span dir="LTR">pET28a+</span> زیرهمسانه‌سازی شد و سپس به میزبان <em><span dir="LTR">E. coli</span></em><span dir="LTR"> BL21DE3</span> تراریخت شد. پروتئین نوترکیب با القاء <span dir="LTR">IPTG</span> بیان شد. برای بیان حداکثری، سه پارامتر شامل غلظت <span dir="LTR">IPTG</span>، زمان و دما بهینه‌سازی گردید. پروتئین نوترکیب حاوی <span dir="LTR">His-Tag</span> به‌وسیله ستون کروماتوگرافی &nbsp;تعویض یون <span dir="LTR">Ni-NTA Agarose</span> خالص‌سازی شد. پروتئین خالص‌شده با آزمایش وسترن بلات تائید شد.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته‌ها</strong>: وکتور نوترکیب با واکنش <span dir="LTR">PCR</span> و نیز آنالیز آنزیم‌های تحدیدی تائید شد. آزمایش <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> وجود یک پروتئین 51 کیلو دالتونی با خلوص مناسب را نشان داد. همچنین آزمایش وسترن بلات با آنتی‌بادی <span dir="LTR">His-tag</span> پروتئین مدنظر را تائید نمود.</p> <p dir="RTL"><strong>بحث و نتیجه‌گیری</strong>: امروزه استفاده از واکسن‌های نوترکیب بسیار موردتوجه قرار گرفته است. با توجه به اینکه در مطالعه حاضر ژن یکی از مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌‌زایی باکتری سالمونلا همسانه‌‌سازی و پروتئین مربوط به آن تولید و تخلیص شده است. این پروتئین می‌تواند به‌عنوان یکی از کاندیداهای مناسب در واکسن‌های نوترکیب علیه تیفوئید مورداستفاده قرار گیرد.</p> <p dir="LTR"><a name="_Toc416081061"><strong><em>Background &&nbsp;Aims: </em></strong></a><em>Salmonella enterica</em> is a zoonotic pathogen causing typhoid fever in humans and animals. <a name="OLE_LINK2"></a><a name="OLE_LINK1">It is an important cause of food borne infections in humans throughout the world</a>. A recent study estimated approximately 22 million cases of typhoid each year with at least 200,000 deaths. FliC encoding flagellin plays a role in pathogenesis and is an important antigen in vaccination. In this study, recombinant protein fliC as a candidate vaccine against salmonellosis was produced and purified.</p> <p dir="LTR"><strong><em>Materials & Methods: </em></strong>The protein sequence of fliC was obtained from NCBI database. For high level expression of protein, the gene was synthesized with codon bias of <em>E. coli</em>.; synthetic gene in pUC57 was sub coloned into pET32 expression vector and then transferred into <em>E. coli</em> BL21DE3. The recombinant protein was express by IPTG induction. For high expression, three parameters including IPTG concentration, time and temperature of induction were optimized. The recombinant protein was purified by ion exchange chromatography with His-Tag. The purified protein was confirmed by western blotting.</p> <p dir="LTR"><strong><em>Results: </em></strong>Recombinant vector was approved by PCR and restriction analysis. SDS-PAGE showed a 51 kDa protein with proper purity and western blotting with his-tag antibody confirmed the intend protein.</p> <p dir="LTR"><strong><em>Conclusion</em></strong><strong>:</strong> The use of recombinant vaccines is highly regarded, since one of the major virulence factors of Salmonella gene was cloned and the protein was produced and purified in this study. This protein can be used in candidate vaccine against typhoid.</p> <p align="center" dir="LTR"></p> <p align="center" dir="LTR">SOURCE: URMIA MED J 2016: 27(8): 691 ISSN: 1027-3727</p> کلیدواژه: سالمونلا, واکسن نوترکیب, fliC, کلون و بیان Salmonella, Recombinant Vaccine, fliC, Cloning and expression 683 691 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2483-1&slc_lang=fa&sid=1 Zahra Adeli زهرا عادلی zahraaa-adeliii@gmai.com 3700319475328460016336 3700319475328460016336 No Department of Microbiology, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damghan, Iran دانشگاه آزاد دامغان Najmeh Farahani نجمه فراهانی gheibi65@yahoo.com 3700319475328460016337 3700319475328460016337 No Department of Genetics and Molecular Biology, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran دانشگاه علوم پزشکی اصفهان Seyed Ahmad Mosavi سید احمد موسوی seyed-ahmad-mosavi-47@gmail.com 3700319475328460016338 3700319475328460016338 No Department of Health and Community Medicine, Faculty of Medicine, Dezful University of Medical Sciences, Dezful, Iran دانشگاه علوم پزشکی دزفول Seyed Yaghoob sehri سید یعقوب صهری sehrisehri.med@gmail.com 3700319475328460016339 3700319475328460016339 No Faculty of Medicine, Najmiyeh Hospital, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله Hekmat allah Moradi Mogarmoon حکمت الله مرادی موگرمون morad20384@gmail.com 3700319475328460016340 3700319475328460016340 No Education Development Center, School of Medicine, Medical University of Shiraz, Shiraz, Iran دانشگاه علوم پزشکی شیراز Seyed Mohammad Gheibi hayat سید محمد غیبی حیات 3700319475328460016341 3700319475328460016341 Yes Student Research Committee, Department of Medical Biotechnology, Faculty of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran دانشگاه علوم پزشکی مشهد