fa طراحی و ساخت پلاسمید نوترکیب حاوی ترکیب ژن‌های Ag85B و TB10.4 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس میکروبیولوژی میکروبیولوژی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research <p dir="rtl"><strong>پیش‌زمینه و هدف:</strong> علی‌رغم استفاده از واکسن ب.ث.ژ از سال 1921 تابه‌حال، هنوز بیماری سل به‌عنوان دومین عامل مرگ‌ومیر در بین بیماری‌های عفونی محسوب می‌گردد. با افزایش مقاومت عامل مولد سل (مایکوباکتریوم توبرکولوزیس) به آنتی‌بیوتیک‌های معمول و وسیع‌الطیف و همچنین با ظهور HIV و عفونت این ویروس با مایکوباکتریوم توبرکولوزیس، مقابله با این بیماری بیشتر به چالش کشیده شده است. شناخت آنتی‌ژن‌های مؤثر در ایمنی‌زایی محافظتی می‌تواند به‌عنوان کاندیدی برای طراحی واکسن‌های نوین باشد. ازجمله این آنتی‌ژن‌ها Ag85B و TB10.4 می‌باشد که با وزن مولکولی به ترتیب 30 و 10 کیلودالتون توسط لنفوسیت‌های T شناخته‌شده و سبب القاء پاسخ قوی Th1 و درنتیجه بالا بردن تولید IF-&gamma می‌گردند. هدف از این تحقیق، ساخت کاست ژنی حاصل از تلفیق دو ژن فوق در درون وکتور pcDNA3 می‌باشد.</p> <p dir="rtl"><strong>مواد و روش‌ها</strong>: DNA متعلق به مایکوباکتریوم توبرکولوزیس سویه H37Rv به روش روتین استخراج گردید. ژنوم کدکننده این دو آنتی‌ژن توسط پرایمرهای اختصاصی به روش PCR تکثیر و سپس تلفیق گردید و پس از هضم آنزیمی درون وکتور یوکاریوتی pcDNA3 کلون گردید. پلاسمید نوترکیب فوق در باکتری E.coli DH5&alpha ترنسفورم گردید و پس از تخلیص، توسط آنالیز آنزیمی و توالی‌یابی مورد تأیید واقع شد.</p> <p dir="rtl"><strong>یافته‌ها</strong>: نتایج تعیین توالی و آنالیز آنزیمی تأیید نمود که کلونینگ با موفقیت انجام شده است.</p> <p dir="rtl"><strong>بحث</strong> <strong>و نتیجه‌گیری</strong>: قطعات TB10.4 و Ag85B ترکیب گردید و در وکتور pcDNA3 با موفقیت کلون گردید. در مطالعات بعدی می‌توان بیان ژن را در رده سلولی ارزیابی نمود و از این کاست ژنی به‌عنوان واکسن DNA استفاده نمود.</p> <p dir="rtl"></p> <p></p> <p><em><strong>Background & Aims</strong></em>: Tuberculosis (TB), caused by <em>Mycobacterium tuberculosis (</em>Mtb<em>),</em> remain as a leading causes of mortality among infectious diseases. The only current vaccine, bacillus Calmette-Gue´rin (BCG), displays highly variable efficiency for preventing tuberculosis. Thus, identification of protective antigens could be mentioned for designing new vaccines. Among different Mtb antigens, TB10.4 and Ag85B have been identified as immune stimulator antigens which induce strong cellular responses and increase production of IFN-&gamma. In this study, we aimed to clone the fusion form of these antigens into a eukaryotic vector (pcDNA3).</p> <p><strong><em>Materials & Methods</em></strong>: After extraction of <em>Mycobacterium tuberculosis</em> H37Rv genome, the selected genes were amplified by specific primers with PCR method. The gene segments were fused and cloned into eukaryotic pcDNA3 vector. Recombinant plasmid was transformed into <em>E.coli</em> DH5&alpha and after purification was confirmed with restriction enzyme analysis and sequencing.</p> <p><strong><em>Results</em></strong>: The results of sequencing and digestion demonstrated that TB10.4 & Ag85B genes were successfully fused and cloned into pcDNA3 vector</p> <p><strong><em>Conclusion</em></strong>: The recombinant plasmid was successfully constructed. In the future studies, the immunogenicity of this cassette could be assessed as a DNA vaccine.</p> <p>SOURCE: URMIA MED J 2015: 26(7): 616 ISSN: 1027-3727</p> کاست ژنی, TB10.4 و Ag85B, مایکوباکتریوم توبرکولوزیس Mycobacterium tuberculosis, TB 10.4, Ag 85B, Fusion Gene 609 616 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1426-2&slc_lang=fa&sid=1 Roghayeh Samanipour رقیه سامانی‌پور 3700319475328460013040 3700319475328460013040 No Department of Biology, Faculty of Sciences, University of Ilam, Ilam, Iran دانشکده علوم پایه، دانشگاه ایلام، ایلام، ایران Majid Tebianian مجید تبیانیان m.tebianian@rvsri.ac.ir 3700319475328460013041 3700319475328460013041 Yes Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, Iran موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Nader Mosavari نادر مصوری 3700319475328460013042 3700319475328460013042 No Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, Iran موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Salman Ahmady Asbchin سلمان احمدی اسبچین 3700319475328460013043 3700319475328460013043 No Department of Biology, Faculty of Sciences, University of Ilam, Ilam, Iran دانشکده علوم پایه، دانشگاه ایلام، ایلام، ایران , Morteza Taghizadeh مرتضی تقی‌زاده 3700319475328460013044 3700319475328460013044 No Razi Vaccine & Serum Research Institute Karaj, Iran موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Kioomars Soleimani کیومرث سلیمانی 3700319475328460013045 3700319475328460013045 No Razi Vaccine & Serum Research Institute Karaj, Iran موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران