Studies in Medical Sciences

fa ارائه روش معتبرسازی اندازه‌گیری اسیدفولیک در آرد و نان غنی‌شده به روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) با به‌کارگیری دتکتور فلورسانس AN IMPROVED SIMPLE AND PRECISE HPLC METHOD FOR DETERMINATION OF FOLIC ACID IN FORTIFIED WHEAT FLOURS AND BREADS WITH FLUORESCENCE DETECTION آناتومی آناتومی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research پیش‌زمینه و هدف: عمل غنی‌سازی آرد به‌عنوان مناسب‌ترین حامل جهت جبران کمبود آهن و اسیدفولیک در جیره غذائی، در سال‌های اخیر موردتوجه مسئولین بهداشت قرار گرفته است و از آنجائی که موضوع کنترل کیفی و کمی مواد غذایی از مباحث مهم در ارتباط با سبد غذایی افراد در هر جامعه محسوب می‌شود لذا در این خصوص لازم است تا انواع مواد موجود در مواد غذایی ازجمله اسیدفولیک مورد آنالیز واقع گردد. روش‌های متعددی برای اندازه‌گیری اسیدفولیک در مقالات علمی ارائه گردیده است، ولی عملاً" روش دقیق، آسان و مورداطمینانی تابه‌حال در ایران گزارش نشده است که در این تحقیق با توجه به مطالعات انجام‌یافته و بررسی مقالات متعدد در این زمینه، روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا با استفاده از دتکتور فلورسانس به دلیل حساسیت بالا برای آنالیز میزان اسیدفولیک در نمونه‌های آرد و نان غنی‌شده طراحی گردید. مواد و روش‌ها: از آنجائی که اسیدفولیک خاصیت فلورسانس نداشته ما در این پروژه سعی نمودیم ساختمان شیمیائی این ویتامین را به کمک پرمنگنات به فرم فلئوروفور تبدیل نمائی‌ام. در این روش، پس از رسم منحنی کالیبراسیون استاندارد و استخراج اسیدفولیک از نمونه آرد و نان، میزان آن توسط دستگاه HPLC مورداندازه‌گیری قرار می‌گیرد. جهت تشخیص و اندازه‌گیری مقادیر اسیدفولیک از دتکتور فلورسانس با طول‌موج تحریکی 296 نانومتر و طول‌موج نشری 440 نانومتر استفاده گردید. زمان بازداری برای اسیدفولیک 07/1 دقیقه به دست آمد. به‌عنوان فاز متحرک مخلوطی از متانول و آب دیونیزه به نسبت 20 به 80 استفاده شد. سرعت جریان فاز متحرک 1 میلی‌لیتر در دقیقه تنظیم گردید. سیستیم HPLC شامل یک پمپ گرادیانت، ستون از نوع C18 به طول 10 سانتیمتر و قطر 6/4 میلی‌متر بود. یافته‌ها: منحنی کالیبراسیون در فاصله غلظتی 8-1/0 میکروگرم بر لیتر در محدوده خطی قرار دارد و در این روش حد تشخیص 03/0 میکروگرم بر لیتر حاصل گردید. منحنی جذب اسیدفولیک در زمان 12/1 دقیقه ظاهر گردید. نتایج آنالیزها نشان دادند که ضریب تغییرات درون روزی برای 3 غلظت ذکرشده، بین 37/2 – 07/0 میکروگرم بر لیتر 5 قرار داشت. برای تغییرات بین روزی نیز 3 غلظت مختلف ذکرشده موردبررسی قرار گرفتند. نتایج آنالیز آن‌ها نیز نشان داد که ضریب تغییرات بین روزی بین 82/7 –09/3 میکروگرم بر لیتر قرار داشت. این آزمایش‌ها سه بار بر روی هر نمونه انجام شد. بررسی نتایج نشان‌دهنده استخراج حدود 72درصد در نمونه‌های آرد و نان هست. مقدار اسیدفولیک در آردها و نان‌ها به ترتیب 102 و 85 میکروگرم بر 100 گرم را نشان می‌دهد که گویای کاهش 67/16 درصدی از مقدار اسیدفولیک در طی پروسه تهیه نان می‌باشد.نتیجه‌گیری: روش ما نشان داد که می‌تواند به‌عنوان یک روش آنالیز برای کنترل و اندازه‌گیری مقدار اسیدفولیک در آردهای غنی‌شده در آزمایشگاه‌های کنترل غذا و دارو به‌عنوان یک روش ساده و دقیق برای تعیین مقدار اسیدفولیک مورداستفاده قرار گیرد. نتایج حاصل از آنالیزها در خصوص میزان تکرارپذیری، صحت و دقت روش، میزان درصد بازیافت و حد تشخیص روش، همگی بیانگر اعتبار علمی و عملی این روش آنالیز می‌باشند و نیز همخوانی نتایج به‌دست‌آمده با نتایج سایر منابع علمی تائید کننده این مسئله می‌باشد. Background & Aims: Folic acid is one of the important hematopoietic agents necessary for proper regeneration of the blood forming elements and their functioning. Since humans cannot synthesize folates, they must be obtained from dietary sources. The most important dietary sources of folates are fortified foods and cereal products with folate content of 50-200 μg/100 g. In Iran the majority of people consume bread as an ideal food because of its low price and availability. The objective of this study was to develop a simple and precise High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method for determination of folic acid in enriched wheat flours and bread.Materials & Methods: The method combines several procedures including an extraction technique, oxidation of folic acid to increase fluorescent properties, and an improved HPLC with fluorescence detection method. The method was performed on a C18 analytical column. The mobile phase consisted of a mixture of methanol and pure water (20/80).The elute was continuously monitored using a fluorescence detector (λex 296 nm and λem 440 nm).Results: The standard curve for folic acid passed through the origin and was linear over the range 0.1 – 8µg/L. The peak of folic acid appeared as sharp with retention times of 1.12 minutes. The intra-day coefficient of variation was evaluated in the range of 3.09-7.82 µg/L. The Inter day coefficients of variation for the method ranged between 2.37 and 5.07 µg/L. The accuracy of the method ranges between 99.2% and 103.7% for intra-day analysis and 98.8% and 106.9% for inter-days analysis. The limit of determination for folic acid was 0.03µg/L. The mean concentration of folic acid was 102 µg and 85 µg per 100 gram of flour and bread respectively. The amount of folic acid was decreased during preparation and fermentation process (16.67%).Conclusions: The obtained results indicated that this method is a rapid, sensitive, and precise technique for measurement of folic acid in enriched wheat flours and breads. SOURCE: URMIA MED J 2015: 25(12): 1111 ISSN: 1027-3727 اسیدفولیک, غنی‌سازی, HPLC, دتکتور فلورسانس Folic acid, HPLC, Flour, Bread 1102 1111 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-582-561&slc_lang=fa&sid=1 Amir Heydari امیر حیدری heydari.866@gmail.com 3700319475328460011309 3700319475328460011309 Yes Department of Pharmacology, Faculty of Pharmacy, Food and Beverages Safety Research Center, Urmia University of Medical Sciences گروه فارماکولوژی، مرکز تحقیقات سلامت مواد غذائی و آشامیدنی، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه Mohammad Reza Vardast محمدرضا وردست 3700319475328460011310 3700319475328460011310 No Department of Medicinal Chemistry, Faculty of Pharmacy, Urmia University of Medical Sciences گروه شیمی داروئی دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه Samal Yeganeh Zare سامال یگانه زارع 3700319475328460011311 3700319475328460011311 No Food and Beverages Safety Research Center, Urmia University of Medical Sciences, مرکز تحقیقات سلامت مواد غذائی و آشامیدنی، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه