Studies in Medical Sciences

fa بررسی میزان آپوپتوز در سلول‌های هیپوکامپ به دنبال تزریق داخل وریدی سلول‌های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان در مدل ایسکمی- ریپرفیوژن موش صحرایی EVALUATION OF APOPTOSIS IN HIPPOCAMPAL CELLS OF RAT FOLLOWING INTRAVENOUS INJECTION OF BONE MARROW STROMAL CELLS IN ISCHEMIA-REPERFUSION MODEL آناتومی آناتومی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research پیش‌زمینه و هدف: ایسکمی مغزی به‌عنوان یک معضل بزرگ جهانی شناخته شده است و ریپرفیوژن متعاقب آن درنهایت منجر به مرگ برنامه‌ریزی‌شده سلولی یا آپوپتوز می‌گردد. نواحی مشخصی از مغز و انواع خاصی از نورون‌ها ازجمله نورون‌های هرمی ناحیه CA1 هیپوکامپ نسبت به ایسکمی مغزی حساس‌ترند. یکی از روش‌های درمانی که امروزه به‌طور شایع در بین محققین رواج دارد سلول درمانی (cell therapy) می‌باشد. لذا در این مطالعه برآن شدیم تا میزان آپوپتوز در سلول‌های هیپوکامپ را پس از تزریق داخل وریدی سلول‌های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان (BMSCs) در مدل ایسکمی- ریپرفیوژن موردبررسی قرار دهیممواد و روش‌ها: در این مطالعه 40 سر موش صحرایی نر بالغ با وزن 250-300 گرم به‌طور تصادفی به پنج گروه هشت‌تایی تقسیم شدند که شامل گروه‌های کنترل، شم، ایسکمی، vehicle،treatment بودند گروه شم متحمل استرس جراحی بدون مسدود کردن شریان‌های کاروتید مشترک شد. در گروه ایسکمی شریان‌های کاروتید مشترک هردو طرف به مدت بیست دقیقه مسدود شده و سپس مجدداً جریان خون برقرار شد. در گروه vehicle ایسکمی ایجادشده و پس از 7 روز 30µl PBS از طریق ورید دمی تزریق شد. در گروه treatment ایسکمی ایجاد شد و پس از 7 روز سلول‌های BMSC به تعداد 800 هزار در 30µl سوسپانسیون سلولی از طریق ورید دمی تزریق شد.72 ساعت قبل از تزریق سلول‌ها با Brdu نشان‌دار شدند. در روز 12 پس از ایسکمی با روش پرفیوژن داخل قلبی و با پارافرمالدئید 4 درصد موش‌ها فیکس شدند و مغز آن‌ها خارج گردید و پس از پردازش بافتی برش‌های 5 میکرونی تهیه شد. جهت شناسایی سلول‌های BMSC بررسی ایمونوهیستوشیمی با آنتی‌بادی Anti-Brdu انجام شد. برای نشان دادن سلول‌های آپوپتوتیک از رنگ‌آمیزی تانل استفاده شد.یافته‌ها: در نمونه‌های ایسکمی ایندکس آپوپتوز 37/43 درصد مشاهده شد که این میزان در گروه درمان 61/23 درصد بود این یافته‌ها نشان می‌دهند که میزان آپوپتوز در گروه تحت درمان با سلول‌های بنیادی مغز استخوان در مقایسه با گروه ایسکمی بسیار کمتر بودنتیجه‌گیری: ایسکمی- ریپرفیوژن به مدت 20 دقیقه باعث آسیب و مرگ نورونی وسیع در هیپوکامپ به‌ویژه در ناحیه CA1 می‌شود و تزریق سلول‌های بنیادی مغز استخوان به‌طور معنی‌داری موجب کاهش تعداد نورون‌های آپوپتوتیک می‌گردد. Background & Aims: Cerebral ischemia is known as a major worldwide problem and subsequent reperfusion leads to apoptosis or programmed cell death. Specific regions of the brain and specific types of neurons, including hippocampal CA1 pyramidal neurons are more sensitive in cerebral ischemia. Today cell therapy is one of the common treatments that spread among the researchers. In this study, we evaluated apoptosis in hippocampal cells of rat following intravenous injection of bone marrow stromal cells (BMSCs) in ischemia-reperfusion model.Materials & Methods: In this study, adult male wistar rats (n=40) weighting (250-300g) were used. The rats were divided into the five groups of 8 animals including: control, sham, ischemia, vehicle, and treatment. In the sham group surgery was performed without blocking common carotid arteries. In ischemia group common carotid arteries blocked for twenty minutes and then allowed to reperfusion. In the vehicle group 7 days after ischemia, 30µl PBS was injected via tail vein. In the treatment group BMSC cells (800000/ 30 µl suspension) were injected into the tail vein 7 days after ischemia. And 72 hours before transplantation, the cells were labeled with Brdu. 12 days after ischemia, rats were fixed with 4% Paraformaldehyde through transcardial perfusion and their brains were removed. After histological processing, 5 micron sections were prepared for staining. For immunohistochemistry study anti-Brdu anti-body was used and BMSC cells were identified. Apoptotic cells were detected by TUNEL staining.Results: Sever apoptosis was observed in ischemia group. The mortality rate in the group which was treated with BMSC was lower.Conclusion: Ischemia-reperfusion for 20 minutes causes damage and extensive neural death in the hippocampus, especially in CA1 region and injection of bone marrow stromal stem cells significantly decreased the number of apoptotic neurons. SOURCE: URMIA MED J 2014: 25(7): 597 ISSN: 1027-3727 ایسکمی- ریپرفیوژن, هیپوکامپ, سلول‌های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان, آپوپتوز Ischemia, Reperfusion, Hippocampal, Bone marrow stromal cells, Apoptosis 586 597 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-582-509&slc_lang=fa&sid=1 Bagher Pourheydar باقر پورحیدر 3700319475328460010296 3700319475328460010296 No Department of AnatomyFaculty of Medicine, Neurophysiology Research Center, Urmia University of Medical Sciences گروه علوم تشریحی، دانشکده پزشکی ارومیه، مرکز تحقیقات نوروفیزیولوژی، دانشگاه پزشکی ارومیه Maryam Shahi مریم شاهی bpourheydar@yahoo.com 3700319475328460010297 3700319475328460010297 Yes Department of Anatomy, Faculty of Medicine, Urmia University of Medical Sciences دانشکده پزشکی ارومیه، Gholam Hossein Farjah غلامحسین فرجاه ، 3700319475328460010298 3700319475328460010298 No Department of Anatomy, Faculty of Medicine, Neurophysiology Research Center, Urmia University of Medical Sciences گروه علوم تشریحی، دانشکده پزشکی ارومیه، مرکز تحقیقات نوروفیزیولوژی، دانشگاه پزشکی ارومیه Masoome Javanmard معصومه جوانمرد 3700319475328460010299 3700319475328460010299 No Department of Anatomy, Faculty of Medicine, Urmia University of Medical Sciences گروه علوم تشریحی، دانشگاه پزشکی ارومیه Mojtaba Karimipour مجتبی کریمی پور 3700319475328460010300 3700319475328460010300 No Department of Anatomy, Faculty of Medicine, Urmia University of Medical Sciences گروه علوم تشریحی، دانشگاه پزشکی ارومیه Fatemeh Atabaki فاطمه اتابکی 3700319475328460010301 3700319475328460010301 No Department of Anatomy, Faculty of Medicine, Urmia University of Medical Sciences گروه علوم تشریحی، دانشگاه پزشکی ارومیه