Studies in Medical Sciences

fa بهینه‌سازی شرایط جداسازی سلول‌های هسته‌دار خون بند ناف جنینی با استفاده از هیدرو کسی اتیل استارچ(HES) OPTIMIZATION OF THE CONDITIONS IN ISOLATION OF NUCLEATED CELLS FROM UMBILICAL CORD BLOOD USING HYDROXYETHYL STARCH آناتومی آناتومی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research پیش زمینه و هدف: استفاده از سلول‌های خون بند ناف به عنوان یک منبع غنی از سلول‌های بنیادی پنجره جدیدی به روی درمان‌های ترمیمی مبتنی بر سلول گشوده است. روش‌های متنوع زیادی برای جداسازی سلول‌های هسته‌دار خون بند ناف به کار گرفته شده است. هیدروکسی اتیل استارچ یک عامل القا سدیمانتاسیون گلبول‌های قرمز است که گزارش‌های متنوع و گاهاً متضادی درباره غلظت بهینه و توانایی آن در کاهش تعداد گلبول‌های قرمز خون وجود دارد. بنابراین مطالعه حاضر به منظور تعیین شرایط و غلظت نسبی بهینه هیدروکسی اتیل استارچ، نیروی نسبی سانتریفوژ، دما و قطر لوله در راندمان جداسازی سلول‌های هسته‌دار خون بند ناف انجام پذیرفت.مواد و روش‌ها: خون بند ناف از زنان با زایمان طبیعی جمع‌آوری شد. اثربخشی فرایند جداسازی از طریق شمارش سلولی و برآورد زیستایی سلول‌ها پس از هر مرحله جداسازی در غلظت‌های متفاوت هیدروکسی اتیل استارچ، قدرت‌های نسبی سانتریفوژ مختلف و دماهای متفاوت مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: میانگین کل درصد سلول‌های هسته‌دار جدا شده به ترتیب برای غلظت‌های 5/0، 1/1، 8/1 و 5/2 درصد هیدروکسی اتیل استارچ معادل 8/66، 3/73، 1/75، 9/76 و 9/69 درصد بود. بیشترین میزان سلول‌های هسته‌دار در نیروی نسبی سانتریفوژ g50 و در دمای 22 درجه سانتی‌گراد جدا سازی شد. سدیمانتاسیون خون آمیخته با 5/2 درصد هیدرکسی اتیل استارچ در زمان‌های 30، 60 و 90 دقیقه به ترتیب منجر به جداسازی 57، 63 و 64 درصد کل سلول‌های هسته‌دار خون بند ناف شد.بحث و نتیجه گیری: تعداد کل سلول‌های هسته‌دار و گلبول‌های قرمز در موفقیت فرایند پیوند خون بند ناف نقش اساسی را ایفا می‌کند. در این مطالعه بیشترین میزان جداسازی سلول‌های هسته‌دار 76 درصد با کاهش 90 درصدی گلبول‌های قرمز بود که در شرایط سانتریفوژ با نیروی نسبیg 50 به مدت 10 دقیقه در غلظت 5/2 درصد هیدرکسی اتیل استارچ بدست آمد. مطالعات بیشتر به منظور بررسی اثرات سایر عوامل در میزان سدیمانتاسیون گلبول‌های قرمز به منظور جداسازی سلول‌های هسته‌دار لازم است. Background and aims : Implication of Umblical cord blood (UCB) as a safe and rich source of stem cell has opened a new window toward treatment of different disease in regenerative medicine. Many various methods have been exploited to purify the UCB in order to increase the percent of nucleated cells (NCs) and decrease the amount of red blood cells (RBCs) which is required for better outcome of transplantation. Hydroxyl ethyl starch (HES) is a sedimentation factor used for RBCs sedimentation and raised some paradox competence in different studies. Thus, in the present study we are aimed to determine the correlation among HES concentration, centrifugation force, temperature, tube diameter and time on the isolation efficiency of NCs and RBCs sedimentation. Materials and methods : UCB was collected from the woman who was undergone normal vaginal delivery. The efficiency of isolation was investigated through enumeration and viability of NCs and RBCs in each step on taken UCB beyound the different concentrations of HES (0.5%, 1.1%, 1.8%, 2.5% and 3%), various relative centrifugation forces (RCFs) of 50g, 100g and 200g for 1, 5 and 10 minutes, diverse 22° C, 10°C and 4°C temperatures and different . In addition UCB sample was incubated in 22 ° for 30, 60, 90, 120, 150 and 180 minutes to test the effect of time on RBCs sedimentation. The height to diameter ratio effect of test tube also was considered. Results : The mean percents of isolated NCs were 66.8 ± 4.1%, 73.3 ± 3.2%, 75.1 ± 3.6%, 76.9 ± 2.9 % and 69.9 ± 4.3% for the concentrations of 0.5 %, 1.1%, 1.8%, 2.5% and 3% respectively. The most NCs were isolated by employing RCF of 50g and temperature of 22 °. Incubation in 30, 60, 90 minutes led to isolation of 57±2.6%, 63±3.7% and 64±3.1% of NCs. Using of tubes with the diameters of 25 mm and 15 mm resulted in 58±6% and 76±3.8 % isolation . Discussion and conclusion : The number of NCs and RBCs in UBC palys pivotal role in transplantation success. The maximum NCs isolation and RBC<a name="_GoBack"></a>s sedimentation percent were 76% and 90% respectively under the following condition: RCF of 50g, centrifugation for 10 minutes, and incubation for 60 minutes (p<0.05) and HES 2.5%. Further studies are required to assess the effect of other factors on isolation rate of NCs and RBCs sedimentation. SOURCE: URMIA MED J 2013: 24(7): 492 ISSN: 1027-3727 خون بند ناف، هیدروکسی اتیل استارچ، سلول‌های تک هسته‌ای umblical cord blood (UBC), Hydroxyl ethyl starch (HES), Nucleated cells (NCs) 483 492 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-582-389&slc_lang=fa&sid=1 Parvaneh Abbasi پروانه عباسی 370031947532846007855 370031947532846007855 No Tabriz of University of Medical Sciences , Iran Blood Transfusion Center دانشکده پزشکی تبریز، گروه ایمونولوژی، بخش هماتولوژی، مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران Karim Shams asenjan کریم شمس k.shams@ibto.ir 370031947532846007856 370031947532846007856 Yes Department of immunology , Tabriz of University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی تبریز، مرکز تحقیقات خون و انکولوژی Aliakbar Movassaghpour علی اکبر موثق‌پور 370031947532846007857 370031947532846007857 No , Department of immunology , Tabriz of University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی تبریز، مرکز تحقیقات خون و انکولوژی Parvin akbarzadelale پروین اکبرزاده لاله 370031947532846007858 370031947532846007858 No Department of Pharmaceutical Biotechnology , Tabriz of University دانشگاه علوم پزشکی تبریز، دانشکده داروسازی، گروه بیوتکنولوژی داروئی Fateme sabaghi فاطمه صباغی 370031947532846007859 370031947532846007859 No Research center of iran Blood Transfusion مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران ، تبریز، Abdolnaser Moghadam عبدالناصر مقدم 370031947532846007860 370031947532846007860 No East Azerbaijan Blood Transfusion Headquarters اداره کل انتقال خون استان آذربایجان شرقی Nima Dehdilani نیما ده دیلانی 370031947532846007861 370031947532846007861 No East Azerbaijan Blood Transfusion Headquarters مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران Parisa Lotfinejad پریسا لطفی‌نژاد 370031947532846007862 370031947532846007862 No University of Medical Sciences, Tabriz دانشگاه علوم پزشکی تبریز،