Studies in Medical Sciences

fa ارزیابی فراوانی زیرگونه‌های ژیاردیالامبلیا به روش PCR-RFLP در نمونه‌های مدفوع کودکان بستری شده در مرکز آموزش و درمانی مطهری شهر ارومیه EVALUATION OF FREQUENCY OF GIARDIA LAMBLIA SUB SPECIES BY PCR-RFLP IN HOSPITALIZED CHILDREN,S STOOL SPECIMENS IN URMIA MUTAHHARI HOSPITAL آناتومی آناتومی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research پیش زمینه و هدف: ژیاردیا لامبلیا یکی از شایع‌ترین پروتوزواهای تاژکدار روده‌ای است که گروه وسیعی از میزبانان مهره‌دار را آلوده می‌کند. ژیاردیا یکی از معمول‌ترین پاتوژن‌های روده‌ای در بچه‌هاست که باعث اختلالات شدید روده‌ای و تأخیر در رشد می‌شود.این مطالعه برای تعیین زیرگونه‌های ژیاردیالامبلیا به وسیله روش PCR-RFLP با استفاده از ناحیه گلوتامات دهیدروژناز از کودکان بستری شده در بیمارستان مطهری ارومیه، آذربایجان غربی در ایران انجام گرفت.مواد و روش‌ها: در این مطالعه، 34 نمونه مدفوع از کودکان بستری شده در بیمارستان مطهری ارومیه که با استفاده از میکروسکوپ نوری دارای کیست‌های ژیاردیا بودند جمع‌آوری شد. کیست‌ها به طور نسبی به وسیله روش گرادیان سوکروز تغلیظ و سپس جهت حذف موثر مهار کننده‌های PCR، به وسیله آب مقطر استریل شستشو داده شد. DNA ژنومیک انگل ژیاردیا به وسیله سیکل‌های انجماد و ذوب کردن و سپس روش فنل کلروفرم استخراج شد. برای تمایز زیرگونه‌های A، B که در انسان‌ها یافت می‌شود یک آزمایش PCR-RFLP تک مرحله‌ای انجام گرفت. در این روش یک قطعه‌ای به اندازه432 bp مورد انتظار بود، تکثیر یافت و سپس برای تعیین زیرگروه‌های انگل، از آنزیم‌های محدود کننده اختصاصی RsaI، BspL1 استفاده شد.یافته‌ها: از 720 نمونه بررسی شده میکروسکوپی، به طور کلی 34 نمونه از نظر وجود کیست ژیاردیا مثبت بودند که میزان شیوع انگل 72/4درصد گزارش شد.آزمایش PCR-RFLP بر روی این نمونه‌ها آشکار کرد که 28 نمونه (3/93%) دارای ژنوتایپ BIII و دو نمونه (7/6%) متعلق به زیر گروه BIV می‌باشد.نتیجه گیری: PCR-RFLP یک روش قوی و قابل اعتمادی است که ما را در تعیین موثر ژنوتایپ در بین زیرگونه‌های ژیاردیا با استفاده از ژن ناحیه گلوتامات دهیدروژناز میسر ساخته و شناسایی وجود ژنوتایپ‌های مخلوط را ممکن می‌سازد. بر اساس نتایج یک منشأ حیوانی از عفونت پیشنهاد می‌شود. Background & Aims : Giardia lamblia is one of the most prevalent intestinal flagellate protozoan that infects a wide range of vertebrate hosts . Giardia is one of the most common intestinal pathogens in children causing sever intestinal disorder and growth retardation. This study was performed to determine subspecies of Giardia lamblia by the PCR-RFLP method, targeting the glutamate dehydrogenase(gdh) locus, in hospitalized children at the Urmia Mutahhari hospital, West Azarbaijan Province, Iran Methods : In this study, thirty four stool specimen were collected from the hospitalized children in Urmia Motahhari hospital and dgiardia cysts were detected using microscopy. Cysts were partially purified by the sucrose density gradient method and then washed with sterile distilled water to effectively remove the PCR inhibitors. Genomic DNA of G.lamblia isolates was extracted by freeze-thaw cycles followed by phenol/ chloroform/isoamyl alcohol method. A single step PCR-RFLP assay was used to differentiate the assemblages A and B which been found in humans. In this method, 432 bp expected size were amplified and then for detection sub species were used of specific restriction RsaI and BspLI enzymes. Findings : From 720 examined samples, totally 34 samples were positive in term of giardia cyst so the parasite spread rate was reported 4.72%. Analysis of PCR-RFLP on these samples revealed that 28 samples (93.3%) had the genotype BIII and two samples (6.7%) belonged to the subgroup BIV. Conclusions : PCR-RFLP is a rapid and reliable method that enables us to effective genotype discrimination within Giardia assemblages using glutamate dehydrogenase gene, and makes it possible to identify the presence of mixed genotypes. In the base results, an animal source of infection is suggested. SOURCE: URMIA MED J 2013: 24(6): 422 ISSN: 1027-3727 ژیاردیا لامبلیا، گلوتامات دهیدروژناز، ارومیه، ایران، آذربایجان غربی، PCR-RFLP Giardia, Glutamate dehydrogenase, PCR-RFLP 414 422 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-582-371&slc_lang=fa&sid=1 Gholamreza Manafi غلامرضا منافی 370031947532846008047 370031947532846008047 No Urmia University of Medical Sciences گروه انگل شناسی و قارچ شناسی دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه Khosro Hazrati tappeh خسرو حضرتی تپه hazrati_tappeh@yahoo.co.nz 370031947532846008048 370031947532846008048 Yes Cellular and Molecular Research center, Urmia, University of Medical Sciences مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه Kambiz Diba کامبیز دیبا 370031947532846008049 370031947532846008049 No , Urmia ,University of Medical Sciences دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه Habib Mohammadzadeh حبیب محمدزاده 370031947532846008050 370031947532846008050 No University of Medical Sciences دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه Mohammad Asgharzadeh محمد اصغرزاده 370031947532846008051 370031947532846008051 No Tabriz ,University of Medical Sciences دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز Shahsanam Gheibi شاه صنم غیبی 370031947532846008052 370031947532846008052 No Head of Maternal and Child Obesity Research Center, Urmia University of Medical Sciences, مرکز تحقیقات چاقی مادر و کودک، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه