Studies in Medical Sciences

fa بررسی تأثیر مهار بیان ژن نوکلئوستمین بوسیله siRNA بر مهار رشد و القاء تمایز در رده سلولی NB4 لوسمی پرومیلوسیتیک حاد انسانی STUDY THE EFFECT OF NUCLEOSTEMIN GENE SILENCING BY SIRNA ON GROWTH INHIBITION AND DIFFERENTIATION IN NB4 PROMYELOCYTIC LEUKEMIA CELL LINE آناتومی آناتومی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research پیش زمینه و هدف: لوسمی پرومیلوسیتیکی حاد(APL) نوعی بیماری خونی بدخیم می‌باشد که در اثر تکثیر بی رویه و عدم تمایز سلول‌های بنیادی خون‌ساز ایجاد می‌شود. از راهکارهای اخیر در درمان لوسمی شناسایی مسیرهای سیگنالی درگیر در سلول‌های بنیادی سرطان خون می‌باشد. نوکلئوستمین نقش عمده‌ای در کنترل رشد و خودنوزایی سلول‌های بنیادی و سرطانی دارد. در مطالعه حاضر، اثرات سرکوب بیان ژن نوکلئوستمین بر روی رشد، تمایز و مرگ رده سلولی NB4 به عنوان مدل APL برای اولین بار بررسی شده است.مواد و روش کار: سلول‌های NB4 در حضور غلظت nM200 از siRNA اختصاصی ژن نوکلئوستمین کشت داده شدند. سطح بیان ژن نوکلئوستمین توسط RT-PCR نیمه کمی بررسی گردید. به منظور بررسی مهار رشد و مرگ سلولی به ترتیب آزمون دفع رنگ تریپان بلو و میکروسکوپ فلورسنت به کار گرفته شد. تمایز از نظر ریخت شناسی و بیولوژیکی به ترتیب با استفاده از رنگ آمیزی رایت-گیمسا و فعالیت بیگانه خواری ذرات لاتکس بررسی شد.یافته‌ها: نوکلئوستمین دارای بیان بالایی در سلول‌های NB4 می‌باشد. 48 ساعت پس از تیمار، سطحmRNA نوکلئوستمین در مقایسه با سلول‌های کنترل به میزان 1/36درصد کاهش یافت. 72-12 ساعت پس از تیمار رشد سلول‌ها به میزان 1/35درصد کاهش یافت و همراه با آن ویژگی‌های تمایز نظیر کاهش نسبت هسته به سیتوپلاسم و هضم ذرات لاتکس مشاهده شد که تمایز به سمت رده مونوسیت -ماکروفاژی را تأیید کرد.نتیجه گیری: با توجه به اثرات مهار رشدی و تمایزی مهار نوکلئوستمین در سلول‌هایNB4، خاموشی بیان این ژن می‌تواند به عنوان یک هدف بالقوه در درمان بیماران‌APL پیشنهاد شود. Background & Aims: Acute promyelocytic leukemia (APL) is a malignant hematopoietic disorder caused by indefinite proliferation and lack of differentiation of leukemia stem cells. Elucidation of signaling pathways involved in leukemic stem cells are current strategies in treatment of leukemias. In this content, nucleostemin (NS) plays a critical role in proliferation and self renewal of stem and cancer cells. In the present study, effects of NS gene silencing on proliferation, differentiation and apoptosis in NB4 cell line as an APL model have been studied for the first time. Materials & Methods: NB4 cell line was cultured in the presence of 200 nM NS-siRNA and after transfection with Nucleostemin specific siRNA nucleostemin gene expression pattern was evaluated by Semi-quantitative RT-PCR. Trypan blue exclusion test and fluorescent microscopy were used to study growth inhibitory and apoptotic effects, respectively. Differentiation was studied morphologically and biologically using Wright-Giemsa staining and latex particle phagocytic activity, respectively. Results: NS gene was highly expressed in NB4 cells. NS-siRNA transfection into NB4 cells at 200 nM inhibited nucleostemin mRNA level up to 36.1% after 48h when compared to corresponding control cells. Between 12-72 hours after transfection, the cell growth was decreased up to 35.1% and differentiation characteristics such as decrease in nuclear cytoplasm ratio and ingestion of latex particles were observed, confirmed that differentiation toward monocytic/macrophagic Linage. Conclusion: According to differentiating and growth inhibitory effects of NS inhibition in NB4 cells, it can be proposed as a new target for treatment of APL patients. SOURCE: URMIA MED J 2013: 24(2): 132 ISSN: 1027-3727 نوکلئوستمین، تمایز، مهار رشد، siRNA، NB4 Nucleostemin, Differentiation, Growth inhibition, siRNA, NB4 121 132 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-582-338&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Amin Moosavi سیّدمحمدامین موسوی moosav_m@tabrizu.ac.ir, asvadikermani@tbzmed.ac.ir 370031947532846006827 370031947532846006827 Yes , Faculty of Natural Science, The University of Tabriz دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، تبریز، Nazila Moghtaran Bonab نازیلا مقترن بناب 370031947532846006828 370031947532846006828 No Faculty of Natural Science, The University of Tabriz دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، Mohammad Ali Hoseinpour Feizi محمدعلی حسینپور فیضی 370031947532846006829 370031947532846006829 No Department of Zoology, Faculty of Natural Science, The University of Tabriz دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، Iraj Asvadi Kermani ایرج اسودی کرمانی 370031947532846006830 370031947532846006830 No The Medical Science University of Tabriz دانشگاه علوم پزشکی تبریز،