Studies in Medical Sciences

fa تأثیر لیزات پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس (+NIS) بر بیان ژن‌های bax و bcl-2 ضد آپوپتوز رده سلولی سرطان کلیه THE EFFECT OF LACTOCOCCUS LACTIS (+NIS) PROBIOTIC LYSATE ON THE EXPRESSION OF ANTI-APOPTOTIC BAX AND BCL-2 GENES IN KIDNEY CANCER CELL LINE میکروبیولوژی میکروبیولوژی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research پیش‌زمینه و هدف: امروزه باکتری‌های لاکتوکوکوس لاکتیس به‌عنوان یک پروبیوتیک در درمان و پیشگیری سرطان نقش کلیدی ایفا می‌کنند. علاوه بر این، سویه‌های لاکتوکوکوس لاکتیس تولیدکننده باکتریوسین‌ها قادر به مهار رشد طیف وسیعی از باکتری‌ها، به‌خصوص سویه‌های مقاوم به آنتی‌بیوتیک، است. هدف از مطالعه حاضر بررسی اثرات لیزات پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس (+ NIS) بر بیان ژن‌های ضد آپوپتوز رده سلولی سرطان کلیه است. مواد و روش کار: پس از جداسازی و بررسی 60 سویه پروتئوس میرابیلیس توسط تست‌های تشخیصی و بیوشیمیایی، واکنش Multiplex PCR جهت شناسایی ژن‌های ضد آپوپتوز رده سلولی سرطان کلیه انجام شد. پس از کشت و تهیه سوپرناتانت تولیدکننده نایسین، لاکتوکوکوس لاکتی (PTCC1336)، فعالیت آن توسط چاهک گذاری در آگار بررسی گردید. توسط واکنش Real-Time PCR، بیان ژن AcrB در سویه‌های پروتئوس میرابیلیس تیمار شده با سوپرناتانت موردبررسی قرار گرفت. یافته‌ها: پس از بررسی‌های سمیت سلولی این سوپرناتانت، بیان نسبی ژن‌های bcl-2 و bax در سلول‌های سرطانی کلیه موردمطالعه قرار گرفت. نایسین تهیه‌شده بر روی سویه‌های پروتئوس میرابیلیس به دلیل تحرک و فاکتورهای حدت آن، اثر مهاری اندکی داشت. تجزیه‌وتحلیل سنجش MTT نشان داد که میزان بقای سلولی در سلول‌های سرطانی تیمار شده، با گذر زمان و افزایش غلظت سوپرناتانت بدون سلول لاکتوکوکوس لاکتیس به‌طور قابل‌توجهی کاهش یافته است. از میان 60 نمونه پروتئوس میرابیلیس، 37 نمونه واجد ژن AcrA، 59 نمونه واجد ژن AcrB و 58 نمونه دارای ژن Urea بودند. با توجه به آنالیز داده‌های تست MTT، مقدار غلظت مهارکننده نیمی حداکثر (IC50) برای این سوپرناتانت پس از گذر 72 ساعت μg/ml 8/202 محاسبه شد. بحث و نتیجه‌گیری: نتایج نشان از کاهش 86/52 درصدی بیان ژن bcl-2 و افزایش 21/60 درصدی بیان ژن bax در سلول‌های سرطانی تیمار شده نسبت به گروه کنترل است. بررسی‌های سمیت سلولی در این تحقیق که با IC50 معادل 8/202 میکروگرم/میلی‌لیتر قادر به سرکوب تکثیر سلول‌های سرطانی کلیه (ACHN) بود. هدف مطالعه بررسی اثرات لیزات پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس (+NIS) بر ژن‌های مرتبط با آپوپتوز در سلول‌های سرطان کلیه بود که این لیزات توانستند بیان ژن bcl-2 را کاهش داده و ژن bax را افزایش دهد، و نشان‌دهنده القای آپوپتوز در سلول‌های سرطانی است.   <a name="_Toc416081061">Background &</a> Aims: Today, Lactococcus lactis bacteria play a key role as a probiotic in the treatment and prevention of cancer. Additionally, bacteriocins-producing strains of Lactococcus lactis are able to inhibit the growth of a wide range of bacteria, especially antibiotic-resistant strains. The aim of the present study was to investigate the effects of probiotic lysate of Lactococcus lactis (+NIS) on the expression of anti-apoptotic genes in renal cancer cell lines. Materials and Methods: After isolating and examining 60 strains of Proteus mirabilis through diagnostic and biochemical tests, Multiplex PCR was performed to identify anti-apoptotic genes in renal cancer cell lines. After culturing and preparing the supernatant of nisin-producing Lactococcus lactis (PTCC1336), its activity was examined by plating on agar. Using Real-Time PCR, the expression of AcrB gene in Proteus mirabilis strains treated with supernatant was examined. Results: After the cytotoxicity studies of this supernatant, the relative expression of bcl-2 and bax genes in kidney cancer cells was studied. Nisin prepared for Proteus mirabilis strains had a slight inhibitory effect due to its mobility and virulence factors. MTT assay analysis showed that the cell survival rate in treated cancer cells decreased significantly with the passage of time and increased concentration of Lactococcus lactis cell-free supernatant. Among the 60 Proteus mirabilis samples, 37 samples had the AcrA gene, 59 samples had the AcrB gene, and 58 samples had the Urea gene. According to the analysis of MTT test data, the half-maximal inhibitory concentration (IC50) for this supernatant was calculated to be 202.8 μg/ml after 72 hours. Discussion: The results showed a 52.86% decrease in bcl-2 gene expression and a 60.21% increase in bax gene expression in treated cancer cells compared to the control group. Cytotoxicity studies in this research showed that with an IC50 of 202.8 μg/ml, the supernatant was able to suppress the proliferation of renal cell carcinoma (ACHN). The study demonstrated that probiotic lysate Lactococcus lactis (+NIS) affected genes related to apoptosis in renal cancer cells. These lysates were able to reduce bcl-2 gene expression and increase bax gene expression, indicating the induction of apoptosis in cancer cells.   پروتئوس میرابیلیس, لاکتوکوکوس لاکتیس, نایسین, سرطان کلیه, پروبیوتیک Proteus mirabilis, Lactococcus lactis, Nisin, Kidney cancer, Probiotic 679 694 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5777-1&slc_lang=fa&sid=1 Kumarss Amini کیومرث امینی DR_Kumarss_Amini@yahoo.com 3700319475328460036620 3700319475328460036620 Yes Department of Microbiology, Faculty of Basic Sciences, Saveh Branch, Islamic Azad University, Saveh, Iran (Corresponding Author) گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران (نویسنده مسئول) Hamed Azadifar حامد آزادی فر hamedazadifar.ha@gmail.com 3700319475328460036621 0009-0001-2871-4553 No Department of Microbiology, Faculty of Basic Sciences, Saveh Branch, Islamic Azad University, Saveh, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران