fa بهینه‌سازی فرآیند کشت و تخلیص توکسوئید دیفتری با تقلیل مرحله‌ای میکروبیولوژی میکروبیولوژی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:17pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:&quot;Times New Roman&quot;,serif"><b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">پیش‌زمینه و هدف:</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> دیفتری یک بیماری حاد دستگاه تنفسی قابل‌کنترل با واکسن است که عامل آن باکتری گرم مثبت <i>کورینه باکتریوم دیفتریه</i> است. ازآنجایی‌که تهیه، تخلیص و سمیت‌زدایی واکسن این بیماری شامل مراحل متعدد و پیچیده‌ای است، بنابراین، تحقیق حاضر باهدف کوتاه کردن مراحل مختلف تخلیص توکسوئید، انجام گرفت.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:17pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:&quot;Times New Roman&quot;,serif"><b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">مواد و روش‌ها:</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> برای این منظور و با روش مقایسه‌ای و مداخله‌ای، ابتدا بهینه‌سازی سه فاکتور مقدار آهن محیط کشت، دمای کشت و میزان دور شیکر برای تولید هر چه بیشتر توکسین انجام شد. در هر مورد آزمایش سه بار تکرار شد و مقادیر </span></span>Lf<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> و </span></span>Kf<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">جهت ارزیابی تولید توکسین تست شدند. پس از غیر فعال‌سازی توکسین و تولید توکسوئید، جهت تصفیه و تخلیص توکسوئید از تقلیل مرحله‌ای با کنترل فاکتورهای کیفی استفاده گردید. در این روش از مراحل اولترافیلتراسیون، ترسیب، دیالیز و کروماتوگرافی با ستون سفادکس </span></span>G-25<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> استفاده شد. در شرایط تقلیل مرحله‌ای نیز در حالت اول مرحله دیالیز، در حالت دوم مرحله کروماتوگرافی و در حالت سوم هر دو مرحله دیالیز و کروماتوگرافی حذف شدند. نتایج هر روش با انجام </span></span>SDS-PAGE<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> و بررسی خلوص با نرم‌افزار </span></span>Minitab 18<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> ارزیابی گردید (</span></span>(p&lsaquo;0.05<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:17pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:&quot;Times New Roman&quot;,serif"><b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">یافته‌ها:</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> نتایج حاصل برای بهینه‌سازی محیط کشت نشان داد که مقدار آهن با غلظت ۱ میلی‌گرم در لیتر، دمای 35 درجه سانتی‌گراد و دور شیکر </span></span>rpm<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> 200 منجر به تولید بیشترین مقدار توکسین می‌شوند (</span></span>p&lsaquo;0.05<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">). در آزمایش‌های مربوط به تقلیل مراحل تصفیه و تخلیص توکسوئید، بهترین نتایج در سری نمونه‌های تخلیص شده با مراحل اولترافیلتراسیون، ترسیب و کروماتوگرافی ستونی به دست آمد.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:17pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:&quot;Times New Roman&quot;,serif"><b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">بحث و نتیجه‌گیری:</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> ازآنجاکه در تولید صنعتی، زمان و هزینه دو فاکتور کلیدی هستند، لذا با حذف مرحله دیالیز که به‌طور تقریبی دو هفته به طول می‌انجامد، می‌توان تولید توکسوئید برای واکسن دیفتری را با هزینه کمتر و در زمان کوتاه‌تر انجام داد.</span></span></span></span></span></span></span> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:&quot;Times New Roman&quot;,serif"><b><i><span style="font-size:11.0pt">Background & Aim</span></i></b><b><span style="font-size:11.0pt">: </span></b><span style="font-size:11.0pt">Diphtheria is an acute vaccine-controlled respiratory disease caused by the gram-positive bacterium <i>Corynebacterium diphtheria</i>. Since the preparation, purification, and detoxification of the vaccine against this disease involves many and complex steps, the present study aimed reduction of time of various stages of toxoid purification.</span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:&quot;Times New Roman&quot;,serif"><b><i><span style="font-size:11.0pt">Materials & Methods</span></i></b><b><span style="font-size:11.0pt">:</span></b><span style="font-size:11.0pt"> For this purpose, three factors were first optimized for the concentration of iron in the culture medium, incubation temperature and rotation speed to produce more toxins. In each case, the experiment was carried out in triplicate and Lf and Kf values were tested to evaluate toxin production. After toxin inactivation and production of the toxoid, step reductions were performed to purify the toxoid. For this, ultrafiltration, precipitation, dialysis and chromatography with Sephadex G-25 column are used. In step reduction conditions, dialysis, chromatography or both of them were removed in the first, second and third cases, respectively. The results of each method were evaluated by SDS-PAGE and the quantitative data was analyzed using Minitab 18 (p&lsaquo;0.05).</span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:&quot;Times New Roman&quot;,serif"><b><i><span style="font-size:11.0pt">Results</span></i></b><b><span style="font-size:11.0pt">:</span></b><span style="font-size:11.0pt"> The results for optimizing the culture medium showed that highest amounts of toxin were produced at an iron concentration of 1 mg/l, a temperature of 35 &deg;C, and a rotation speed of 200 rpm(p&lsaquo;0.05). In the reduction experiments related to toxoid purification steps, the best results were obtained in a series of purified samples with ultrafiltration, precipitation and column chromatography steps.</span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:&quot;Times New Roman&quot;,serif"><b><i><span style="font-size:11.0pt">Conclusion</span></i></b><b><span style="font-size:11.0pt">:</span></b><span style="font-size:11.0pt"> Since time and cost are two key factors in industrial production, toxoid production for the diphtheria vaccine can be produced at a lower cost and in less time by eliminating the two-week dialysis phase.</span></span></span></span></span> دیفتری, تخلیص, تقلیل مرحله‌ای, توکسوئید Diphtheria, Purification, Step Reduction, Toxoid 565 575 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5495-1&slc_lang=fa&sid=1 Samaneh Mohammad Javad سمانه محمدجواد samane.mohamadjavad@gmail.com 3700319475328460034337 3700319475328460034337 No Razi Vaccine & Serum Research Institute مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی Mojtaba Noofeli مجتبی نوفلی noofeli1234@yahoo.com 3700319475328460034338 3700319475328460034338 Yes Razi Vaccine & Serum Research Institute مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی Ali Nazari Shirvan علی نظری شیروان a_nazari5@yahoo.com 3700319475328460034339 3700319475328460034339 No Razi Vaccine & Serum Research Institute مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی Pejvak Khaki پژواک خاکی khakipejvak53@gmail.com 3700319475328460034340 3700319475328460034340 No Razi Vaccine & Serum Research Institute مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی