fa بهینه سازی تولید پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب در اشرشیا کلی داروسازی داروسازی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research <p><span style="font-size:8.5pt"><strong><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">پیش‌زمینه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">رومیپلاستیم یک پروتئین پیوندی می‌باشد که در بدن عملکردی مشابه با پروتئین ترومبوپویتین دارد و بدین وسیله باعث تحریک مغز استخوان برای ساخت بیش‌تر پلاکت می‌شود. </span></span><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">ترومبوپویتین هورمونی است که تولید پلاکت را کنترل می‌کند.</span></span> <span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">داروی رومیپلاستیم&nbsp;در درمان ترومبوسیتوپنی در بیماران دارای ایمیون ترومبوسیتوپنی مزمن</span></span> (ITP) <span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">زمانی که سایر داروها مانند گورتیکواستروئیدها و ایمنوگلوبولین ها و یا عمل جراحی برداشتن طحال جواب نداده باشد، استفاده می‌شود</span></span><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">. <a name="_Hlk143342891">هدف از این مطالعه، کلونینگ و بهینه‌سازی شرایط بیان ژن و خالص‌سازی پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی </a>بود.</span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><strong><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">مواد و روش کار</span></span></strong><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">: در این مطالعه کاربردی، متغیرهای مستقل مورد استفاده شامل میزان </span></span>OD<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> (4/0، 8/0 و 2/1) در طول موج 600 نانومتر، غلظت </span></span>IPTG<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> (5/0، 1 و 5/1 میلی مولار) و نوع محیط کشت (</span></span>LB, TB, M9<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">) بودند که از روش سطح پاسخ <strong>(</strong></span></span>RSM (Response Surface Methodology))<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> در قالب طرح مرکب مرکزی با نرم‌افزار </span></span>Design-Expert 12<strong> </strong><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">برای پیش‌بینی متغیرهای مستقل بر میزان تولید رومیپلاستیم استفاده گردید.</span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><strong><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">یافته‌ها</span></span></strong><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">: میزان </span></span>OD<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> برابر 8/0، غلظت </span></span>IPTG<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> برابر 1 میلی مولار و محیط کشت </span></span>LB<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> بهترین حالت برای تولید پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب بهینه سازی شد.</span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><strong><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">بحث و نتیجه‌گیری</span></span></strong><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">: از آنجائیکه تولید بهینه پپتیبادی مورد نظر بود، </span></span><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">کلونینگ و بهینه‌سازی شرایط بیان ژن و خالص‌سازی پپتیبادی رومیپلاستیم در سویه </span></span>BL21<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> از باکتری اشرشیا کلی با بهینه‌ترین شرایط که توسط </span></span>RSM<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> انجام گردید، صورت گرفت. همچنین برای اینکه پروتئین به نحو صحیح فولد شود، از مرحله ریفولدینگ در ابتدای خالص‌سازی استفاده شد. </span></span><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">پروتئین‌های دارویی نقش مهمی در درمان‌های نوین پزشکی مولکولی دارند</span></span><span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">.</span></span></span><br> &nbsp;</p> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i><span style="font-size:11.0pt">Background & Aim:</span></i></b><span style="font-size:11.0pt"> Romiplastim is a fusion protein that has the same function as thrombopoietin in the body and thereby, stimulates bone marrow to produce more platelets. Thrombopoietin is a hormone that controls the production of platelets. Romiplastim is used in the treatment of thrombocytopenia in patients with chronic immune thrombocytopenia (ITP) when other drugs like corticosteroids and immunoglobulins or splenectomy have not treated them. The aim of this study was cloning and optimization of gene expression conditions and purification of recombinant Romiplastim peptibody in <i>Escherichia coli</i> bacteria.</span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i><span style="font-size:11.0pt">Materials & Methods:</span></i></b><span style="font-size:11.0pt"> In this practical study, the independent variables used included the amount of ODs (0.4, 0.8 and 1.2) at a wavelength of 600 nm, IPTG concentration (0.5, 1 and 1.5 mM) and the type of culture medium (LB, TB, M9). The Response Surface Methodology (RSM) was used in the form of central composite design with Design-Expert 12 software to predict independent variables on the amount of romiplastim production.</span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i><span style="font-size:11.0pt">Results:</span></i></b><span style="font-size:11.0pt"> OD equal to 0.8, IPTG concentration equal to 1 mM and LB culture medium were optimized for the production of recombinant Romiplast peptibody.</span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><i><span style="font-size:11.0pt">Conclusion:</span></i></b><span style="font-size:11.0pt"> Since the optimal production of peptibody was desired, cloning and optimization of conditions of gene expression and purification of Romiplastim peptibody in BL21 strain of <i>Escherichia coli</i> bacteria were done with the most optimal conditions which were done by RSM. Also, for correct folding of the protein, the refolding step was used at the beginning of the purification. Medicinal proteins play an important role in modern molecular medicine treatments.</span></span></span></span></span><br> <br> &nbsp; کلونینگ, بهینه سازی, پپتیبادی, خالص سازی, رومیپلاسیتم Cloning, Optimization, Peptibody, Purification, Romiplastim 518 534 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5487-1&slc_lang=fa&sid=1 Saleh Shahbazi Azar صالح شهبازی آذر kumleh@guilan.ac.ir 3700319475328460037138 3700319475328460037138 No PhD student in Agricultural Biotechnology, Department of Agricultural Biotechnology, University of Guilan. Rasht, Iran دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، پردیس دانشگاهی دانشگاه گیلان. رشت، ایران Seyed Hasan Hasani Kumle سید حسن حسنی کومله S_shahabzi58@yahoo.com 3700319475328460037139 3700319475328460037139 Yes Associate Professor of Agricultural Biochemistry and Biotechnology, Department of Agricultural Biotechnology, Faculty of Agricultural Sciences, University of Guilan, Rasht, Iran (Corresponding Author) دانشیار بیوشیمی و بیوتکنولوژی کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران (نویسنده مسئول) Ahad Yamchi احد یامچی yamchi@gau.ac.ir 3700319475328460037140 3700319475328460037140 No Associate Professor of Genetic Engineering, Department of Plant Breeding and Biotechnology, Gorgan University of Agricultural Sciences and Natural Resources, Gorgan, Iran دانشیار مهندسی ژنتیک، گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان، گرگان، ایران Majid Shahbazi مجید شهبازی Shahbazim@Goums.ac.ir 3700319475328460037141 3700319475328460037141 No Professor of Immunology and Genetics, Department of Human Genetics, Faculty of Modern Technologies of Medical Sciences, Golestan University of Medical Sciences, Gorgan, Iran استاد ایمونولوژی و ژنتیک، گروه ژنتیک انسانی، دانشکده فن آوری‌های نوین علوم پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گلستان، گرگان، ایران