fa تهیه و بررسی خواص کونژوگه اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا با نانوذره طلا میکروبیولوژی میکروبیولوژی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:17pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">پیش‌زمینه و هدف:</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> <a name="_Hlk119784708"><i>سودوموناس آئروژینوزا</i> یک پاتوژن فرصت طلب و مهمترین عامل عفونت‌های بیمارستانی است که به کمک فاکتورهای ویرولانس مختلف ازجمله اگزوتوکسین </a></span></span>A<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> باعث سپتی‌سمی و مرگ‌و‌میر در بیماران می‌شود. در طی این مطالعه اگزوتوکسین </span></span>A<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> <i>سودوموناس آئروژینوزا</i> به‌عنوان یک فاکتور توکسیک، باهدف به دست آوردن یک ترکیب جدید کاندید واکسن و نوترکیب تهیه شده و با نانوذرات طلا کونژوگه و اثرات ایمنی‌زایی آن در مدل حیوانی مورد ارزیابی قرار گرفت.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:17pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">مواد و روش کار</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">: اگزوتوکسین </span></span>A<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> ذاتی (</span></span>native<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">) ابتدا از محیط کشت <i>سودوموناس آئروژینوزا</i> با رسوب انتخابی و دیالیز استخراج و خالص سازی شد. جهت تولید اگزوتوکسین </span></span>A<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> نوترکیب، </span></span>DNA<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> ژنومی این باکتری به وسیله وکتور مناسب در <i>اشرشیا کلی</i> کلون شد. نانوذرات طلا با استفاده از روش ترکویچ (</span></span>Turkevich<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">) تهیه و با نیروی الکترواستاتیکی به اگزوتوکسین </span></span>A<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> آماده شده کونژوگه شدند. در نهایت اندازه و کونژوگاسیون به ترتیب با استفاده از میکروسکوپ الکترونی و طیف‌سنجی تبدیل فوریه فروسرخ (</span></span>FTIR<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">) تأیید شد. در نهایت داده‌های کمی به‌صورت میانگین سه بار تکرار و انحراف استاندارد و همچنین داده‌های کیفی به‌صورت فراوانی (درصد) ارائه شد.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:17pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">یافته‌ها</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">: نتایج به دست آمده نشان داد که اگزوتوکسین </span></span>A<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> <i>سودوموناس آئروژینوزا</i> از محیط کشت با خلوص نسبی قابل استخراج است. همچنین بیان پروتئین نوترکیب به وسیله <i>اشرشیا کلی</i> و استفاده از وکتور </span></span>PET22b<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> <i>اشرشیا کلی</i> منجر به تولید اگزوتوکسین </span></span>A<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> نوترکیب در غلظت بالا شد. سپس نانوذرات طلا با هر دو اگزوتوکسین </span></span>A<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> ذاتی و نوترکیب کونژوگه شد. نتایج به دست آمده نشان داد که نانوذره طلا با اگزوتوکسین </span></span>A<span style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> به‌خوبی کونژوگه می‌شود.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:8.5pt"><span style="line-height:17pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">بحث و نتیجه‌گیری</span></span></b><span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin">: به‌طور کلی مطالعه حاضر نشان داد که می‌توان اگزوتوکسین </span></span>A<span lang="FA" style="font-size:9.5pt"><span style="font-family:Nazanin"> نوترکیب و ذاتی را با غلظت بالا در آزمایشگاه تولید و با نانوذره طلا کونژوگه کرد.</span></span></span></span></span></span></span> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:Calibri,sans-serif"><a name="_Toc416081061"><b><i><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Background & Aims: </span></i></b></a><i><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Pseudomonas aeruginosa</span></i><span new="" roman="" style="font-family:" times=""> is an opportunistic pathogen and most important cause of hospital infections, which causes septicemia and death through various virulence factors such as exotoxin A. In the present study, <i>P. aeruginosa exotoxin</i> A (as a toxic factor) was prepared with the aim of obtaining a new recombinant vaccine candidate and conjugated with gold nanoparticles and its immunogenic effects were evaluated in an animal model<b><i>.</i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:Calibri,sans-serif"><b><i><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Materials & Methods: </span></i></b><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Native exotoxin A was first extracted and purified from culture medium of <i>P. aeruginosa</i> by selective sedimentation and dialysis. In order to produce recombinant exotoxin A, genomic DNA of this bacterium was cloned in <i>Escherichia coli</i> using a suitable vector. Gold nanoparticles were prepared using Turkevich method and conjugated to the prepared exotoxin A by electrostatic force. Finally, the size and conjugation were confirmed using electron microscopy and fourier-transform infrared (FTIR) spectroscopy, respectively. Finally, quantitative data were presented in average of three repetitions and standard deviation, as well as qualitative data were presented in frequency (percentage).</span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:Calibri,sans-serif"><b><i><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Results: </span></i></b><span new="" roman="" style="font-family:" times="">The obtained results showed that <i>P. aeruginosa exotoxin</i> A can be extracted from the culture medium with relative purity. Also, expression of recombinant protein by <i>E. coli</i> and using of <i>E. coli</i> PET22b vector led to production of recombinant exotoxin A in high concentration. The gold nanoparticles were conjugated with both intrinsic and recombinant exotoxin A. The obtained results showed that the gold nanoparticle is well conjugated with exotoxin A.<b><i></i></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span style="font-family:Calibri,sans-serif"><b><i><span new="" roman="" style="font-family:" times="">Conclusion</span></i></b><b><span new="" roman="" style="font-family:" times="">:<i> </i></span></b><span new="" roman="" style="font-family:" times="">In general, the present study showed that it is possible to produce recombinant and natural exotoxin A with high concentrations</span> <span new="" roman="" style="font-family:" times="">in the laboratory and conjugate it with gold nanoparticles.</span></span></span></span></span><br> &nbsp; آئروژینوزا, اگزوتوکسین, نانوذرات طلا, سودوموناس واکسن Aeruginosa, Exotoxin, Gold Nanoparticles, Pseudomonas, Vaccine 182 190 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5279-1&slc_lang=fa&sid=1 Asghar Tanomand اصغر تنومند tanomanda@tbzmed.ac.ir 3700319475328460034065 3700319475328460034065 No Associate Professor, Department of Microbiology, Maragheh University of Medical Sciences, Maragheh, Iran دانشیار گروه میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی مراغه، مراغه، ایران Masoumeh Abbasi معصومه عباسی masomeabasi55@yahoo.com 3700319475328460034066 3700319475328460034066 Yes Assistant Professor, Department of Microbiology, Malekan Branch, Islamic Azad University, Malekan, Iran (Corresponding Author) استادیار، گروه میکروبیولوژی، واحد ملکان، دانشگاه آزاد اسلامی، ملکان، ایران (نویسنده مسئول)