Studies in Medical Sciences
مجله مطالعات علوم پزشکی
Studies in Medical Sciences
Medical Sciences
http://umj.umsu.ac.ir
37
journal37
2717-008X
2717-008X
10.61186/umj
fa
jalali
1400
9
1
gregorian
2021
12
1
32
8
online
1
fulltext
fa
ایجاد سازواره ژنی برای حذف ژن sipA از باکتری سالمونلا تیفی موریوم: مطالعه آزمایشگاهی
GENERATION OF A GENE CONSTRUCT TO SIPA GENE DELETION OF SALMONELLA TYPHIMURIUM
ژنتیک
ژنتیک
پژوهشي(توصیفی- تحلیلی)
Research
<strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">پیشزمینه و هدف:</span></span></strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> باکتری</span> <em>سالمونلا تیفی موریوم</em> یک باسیل گرم منفی، بدون اسپور، فاقد کپسول، متحرک و دارای فلاژلها یکی از شایعترین پریتریش است. سالمونلا عامل مسمومیتهای غذایی میباشد. توانایی وارد شدن و زنده ماندن در سلولهای میزبان شرط لازم برای بیماریزایی گونههای سالمونلا است. پروتئین تهاجمی سالمونلا یک فاکتور بیماریزایی مهم است که توسط باکتری به سلولهای میزبان منتقل میشود. این مطالعه با هدف ساخت سازوارهی ژنی برای حذف ژن </span><span dir="LTR">SipA</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> از باکتری سالمونلا تیفی موریوم و کلون سازی آن در باکتری اشریشیا کلی انجام گرفت.</span></span><br>
<strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">مواد و روش کار</span></span></strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">: این مطالعه آزمایشگاهی از مهر 1396 تا خرداد 1397 در مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد انجام گرفت. در این تحقیق توالی </span></span><span dir="LTR">5'</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> و </span></span><span dir="LTR">3'</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> ژن </span></span><span dir="LTR">SipA</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> به کمک پرایمرهای اختصاصی آنها و روش </span></span><span dir="LTR">PCR</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> تکثیر گردید. سپس هرکدام از این توالیها به روش </span></span><span dir="LTR">T/Acloning</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> در حامل </span></span><span dir="LTR">pGEM-Teasy</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> کلون و سپس به باکتری اشریشیا کلی ترانسفورم گردید. با استفاده از روش </span></span><span dir="LTR">PCR</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> قطعات مربوط به هر ناحیه تکثیر و تأیید گردید. تأیید نهایی سازوارهی حاصل با استفاده از آنزیمهای </span></span><span dir="LTR">XbaI</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> و </span></span><span dir="LTR">XhoI</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> انجام گرفت.</span></span><br>
<strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">یافتهها</span></span></strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">: نتایج نشاندهندهی کلون سازی موفقیتآمیز ژن موردنظر در باکتری اشریشیا کلی و ساخت سازوارهی ژنی به طول 1520 جفت باز بود. همچنین حامل </span></span><span dir="LTR">pET32</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> به طول 5900 جفت باز ازلحاظ ظرفیت پذیرش بهترین نوع حامل در پذیرش توالی سازواره بود.</span></span><br>
<strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">بحث و نتیجهگیری</span></span></strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">: با توجه به نتایج حاصل در این مطالعه به نظر میرسد که میتوان با قرار دادن یک ژن، ژن آسیبزا را حذف و از آن بهعنوان واکسن تضعیفشده علیه سالمونلوزیس مورد استفاده قرار نمود. بهطوریکه میتوان با روش الکتروپوریشن این سازواره را وارد باکتری سالمونلا تیفی موریوم کرد و سپس بهواسطه تشابه توالیهای فرادست و فرودست ژن </span></span><span dir="LTR">sipA</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> و </span></span><span dir="LTR">Kan</span><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> نوترکیبی همولوگ بین این دو ژن اتفاق میافتد و ژن بیماریزا حذف خواهد شد.</span></span><br>
<strong><span style="font-family:Nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"></span></span></strong>
<a name="_Toc416081061"><strong><em>Background & Aims: </em></strong></a><em>Salmonella</em> <em>Typhimurium</em> is a negative-gram, non-spore, free capsule, moving bacteria with Trish Perry flagella. <em>Salmonella</em> is the most common cause of food poisoning. The ability to enter and survive in host cells is the condition for pathogenic <em>Salmonella</em> species. Proteins of invasive<em> Salmonella</em> are transferred to the host cells by bacteria. This study was performed for generation of a gene construct to <em>SipA</em> gene deletion of Salmonella Typhimurium and its cloning in <em>E.Coli</em> bacteria.<br>
<strong><em>Materials & Methods: </em></strong>This laboratory study was conducted in biotechnology research center of Islamic Azad University Shahrekord Branch from September 2017 to May 2018. In this study, 5' and 3' sequence of <em>SipA</em> gene was amplified by the specific primers and PCR method. Then, each of these sequences was cloned by the T/A cloning method in pGEM-Teasy vector and then was transformed into <em>E.Coli</em> bacteria. Using the PCR method, the part related to each region was amplified and confirmed. The final confirmation of the produced construct was performed by the <em>Xbal </em>and<em> Xhol</em> enzymes.<br>
<strong><em>Results: </em></strong>The results indicated the successful cloning of the target gene in <em>E.Coli</em> and generation of a gene construct with a length of the 1520 bp. Also, pET32 vector with a length of 5900 bp was the best vector for the admission construct.<br>
<strong><em>Conclusion</em></strong><strong>: </strong>Based on the results, it seems that by inserting a gene, the damaged gene can be deleted and it can be used in the future research as a gene vaccine against <em>Salmonellosis</em>. Also, the target gene can be deleted with electroporation method and transferred into Salmonella Typhimurium, and due to the similarities between upstream and downstream gene sequences of sipA and Kan genes, homologous recombination between these two genes can occur and pathogenic genes will be removed.
کلمات کلیدی: سالمونلا تیفی موریوم, سازوارهی ژنی, اشریشیا کلی, T/A کلونینگ, ژن SipA
SalmonellaTyphimurium, gene construct, E.Coli, T/A cloning, SipA
572
580
http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4758-1&slc_lang=fa&sid=1
Maasomeh
Saki Hosseini
معصومه
ساکی حسینی
m.saki.hoseini@gmail.com
3700319475328460030629
3700319475328460030629
No
M.Sc, Department of Genetics, Islamic Azad University, Shahrekord Branch, Shahrekord, Iran
کارشناس ارشد گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران
Abbas
Doosti
عباس
دوستی
m.saki.hoseini@gmail.com
3700319475328460030630
3700319475328460030630
Yes
Assistant Professor, Department of Genetics, Islamic Azad University, Shahrekord Branch, Shahrekord, Iran (Corresponding Author)
استادیار گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران (نویسنده مسئول)
Milad
Pezeshki
میلاد
پزشکی
milad.pezeshki.bio@gmail.com
3700319475328460030631
3700319475328460030631
No
M.Sc, Department of Genetics, University of Arak, Arak, Iran
کارشناسی ارشد، ژنتیک، دانشگاه اراک، اراک، ایران