fa همسانه‌سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع B باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری E. coli آناتومی آناتومی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research <p class="Chekide" style="TEXT-JUSTIFY: kashida TEXT-ALIGN: justify TEXT-KASHIDA: 0% MARGIN: 0in 0in 0pt unicode-bidi: embed DIRECTION: rtl" dir="rtl"><b><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt">پیش‌زمینه و هدف:</span></b><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"> سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین‌های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین‌ها دارای هفت سروتیپ از </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">A – G</span><span dir="rtl"></span></font></font><span style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> <span lang="AR-SA"><font face="Nazanin" size="2">می‌باشند. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجاد شده توسط </font></span></span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">BONT/B</span><span dir="rtl"></span></font></font><span style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> <span lang="AR-SA"><font face="Nazanin" size="2">استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده‌ی ناحیه اتصالی آن می‌باشد. چون دارای اپی توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی می‌باشد.</font></span></span></p><p class="Chekide" style="TEXT-JUSTIFY: kashida TEXT-ALIGN: justify TEXT-KASHIDA: 0% MARGIN: 0in 0in 0pt unicode-bidi: embed DIRECTION: rtl" dir="rtl"><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt">مواد و روش‌ها: ابتدا سکانس ژن ناحیه اتصالی را از سایت </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">NCBI</span><span dir="rtl"></span></font></font><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> گرفته شد. سپس پرایمرهای مناسب برای آن طراحی شد. سپس باکتری کشت داده شد و ژنوم آن استخراج شد. از </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">PCR</span><span dir="rtl"></span></font></font><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> برای تکثیر ژن استفاده گردید. ژن در وکتور </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">pGEM-Teasy</span><span dir="rtl"></span></font></font><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> وارد شد. بعدوکتور نوترکیب وارد باکتری </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">E. coliDH5α</span><span dir="rtl"></span></font></font><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> گردید. سپس، زیرهمسانه‌سازی در باکتری </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">E. coliBL21</span><span dir="rtl"></span></font></font><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> با استفاده از وکتور بیانی </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">pET28a</span><span dir="rtl"></span></font></font><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span>(+) انجام شد.</span></p><p class="Chekide" style="TEXT-JUSTIFY: kashida TEXT-ALIGN: justify TEXT-KASHIDA: 0% MARGIN: 0in 0in 0pt unicode-bidi: embed DIRECTION: rtl" dir="rtl"><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt">نتایج: واکنش‌های </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">PCR</span><span dir="rtl"></span></font></font><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span>، تعیین توالی و نتایج حاصل از آن توسط </span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">IPTG</span><span dir="rtl"></span></font></font><span style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> <span lang="AR-SA"><font face="Nazanin" size="2">و بررسی بر روی </font></span></span><font size="2"><font face="Times New Roman"><span dir="ltr">SDS – PAGE</span><span dir="rtl"></span></font></font><span style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"><span dir="rtl"></span> <span lang="AR-SA"><font face="Nazanin" size="2">و تائید به روش وسترن نشان‌دهنده صحت کلونینگ و بیان بود.</font></span></span></p><p class="Chekide" style="TEXT-JUSTIFY: kashida TEXT-ALIGN: justify TEXT-KASHIDA: 0% MARGIN: 0in 0in 0pt unicode-bidi: embed DIRECTION: rtl" dir="rtl"><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt">نتیجه‌گیری: کلون و بیان این کاندید واکسن با موفقیت انجام شد و پتانسیل ایمنی‌زایی باید بررسی شود.</span></p><p class="Chekide" style="TEXT-JUSTIFY: kashida TEXT-ALIGN: justify TEXT-KASHIDA: 0% MARGIN: 0in 0in 0pt unicode-bidi: embed DIRECTION: rtl" dir="rtl"><span lang="AR-SA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt"></span></p><p class="Chekide" style="TEXT-JUSTIFY: kashida TEXT-ALIGN: justify TEXT-KASHIDA: 0% MARGIN: 0in 0in 0pt unicode-bidi: embed DIRECTION: rtl" dir="rtl"><span lang="FA" style="FONT-FAMILY: Nazanin FONT-SIZE: 9.5pt mso-ansi-font-size: 8.5pt mso-bidi-language: FA"><p> </p></span></p> <p> <strong> </strong></p><p> <i><strong>Backgrounds & Aims</strong></i>: Botulism is caused by botulinum toxin. The best way to avoid the neurotoxin syndrome caused by BONT/B is to use recombinant vaccine made of BONT/B binding domain because binding domain has sufficient epitops to stimulate immune response.</p><p> <strong><i>Materials & Methods</i>:</strong> Initially BONT/B binding domain gene sequence were obtained from GenBank. Then the primers were designed. PCR reaction was performed. Then gene was ligated to pGEM-Teasy vactor. After verifying the transformation <i>E.coli DH </i><i>5 </i><i>α </i>, subcloning was done. Pet28(a)+ vector was introduced to SDS-PAGE<strong> </strong>and<strong> </strong>Western blot<strong> </strong>confirmed production of the protein.<strong></strong></p><p> <strong><i>Results</i>:</strong> The<strong> </strong>results obtained from PCR sequencing via IPTG induction and expression analysis by SDS-PAGE and its confirmation by Western blot indicated the cloning and expression process accuracy.</p><p> <strong><i>Conclusion</i>: </strong>Finally, this method may be suitable for production of recombinant vaccines without any side effects. Cloning and expression of this vaccine candidate were conducted successfully and its immunization potential should be investigated.</p><p>  </p><p>  SOURCE: URMIA MED J 2014: 25(6): 510 ISSN: 1027-3727 </p> ناحیه اتصالی, همسانه‌سازی, واکسن‌های توکسوئیدی, نوروتوکسین بوتولینوم Clostridium botulinum, BONT/B, Cloning, Expression, Vaccine 502 510 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-582-498&slc_lang=fa&sid=1 Siamak Rezaeiani سیامک رضائیانی 3700319475328460010366 3700319475328460010366 No Department of Biology, Imam Hossein University گروه زیست شناسی دانشگاه امام حسین (ع Firoz Ebrahimi فیروز ابراهیمی febrhimi@ihu.ac.ir 3700319475328460010367 3700319475328460010367 Yes Department of Biology, Imam Hossein University گروه زیست شناسی دانشگاه امام حسین (ع Hossein Honari حسین هنری 3700319475328460010368 3700319475328460010368 No Department of Biology, Imam Hossein University گروه زیست شناسی دانشگاه امام حسین (ع Abbas Hajizade عباس حاجی زاده 3700319475328460010369 3700319475328460010369 No Department of Biology, Imam Hossein University گروه زیست شناسی دانشگاه امام حسین (ع Babak Barati بابک براتی 3700319475328460010370 3700319475328460010370 No Department of Biology, Imam Hossein University گروه زیست شناسی دانشگاه امام حسین (ع