RT - Journal Article T1 - CLONING AND EXPRESSION OF CLOSTRIDIUM BOTULINUM TYPE B BINDING DOMAIN E. COLI JF - URMIAMJ YR - 2014 JO - URMIAMJ VO - 25 IS - 6 UR - http://umj.umsu.ac.ir/article-1-2366-fa.html SP - 502 EP - 510 K1 - Clostridium botulinum K1 - BONT/B K1 - Cloning K1 - Expression K1 - Vaccine AB - پیش‌زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین‌های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین‌ها دارای هفت سروتیپ از A – G می‌باشند. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجاد شده توسط BONT/B استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده‌ی ناحیه اتصالی آن می‌باشد. چون دارای اپی توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی می‌باشد.مواد و روش‌ها: ابتدا سکانس ژن ناحیه اتصالی را از سایت NCBI گرفته شد. سپس پرایمرهای مناسب برای آن طراحی شد. سپس باکتری کشت داده شد و ژنوم آن استخراج شد. از PCR برای تکثیر ژن استفاده گردید. ژن در وکتور pGEM-Teasy وارد شد. بعدوکتور نوترکیب وارد باکتری E. coliDH5α گردید. سپس، زیرهمسانه‌سازی در باکتری E. coliBL21 با استفاده از وکتور بیانی pET28a(+) انجام شد.نتایج: واکنش‌های PCR، تعیین توالی و نتایج حاصل از آن توسط IPTG و بررسی بر روی SDS – PAGE و تائید به روش وسترن نشان‌دهنده صحت کلونینگ و بیان بود.نتیجه‌گیری: کلون و بیان این کاندید واکسن با موفقیت انجام شد و پتانسیل ایمنی‌زایی باید بررسی شود.  LA eng UL http://umj.umsu.ac.ir/article-1-2366-fa.html M3 ER -