fa مطالعه فعالیت و ارزیابی اثرات pH و دما بر سرین پروتئاز و سیستئین پروتئاز در کرم بالغ فاسیولا هپاتیکا انگل و قارچ شناسی انگل و قارچ شناسی پژوهشي(توصیفی- تحلیلی) Research <strong><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">پیش‌زمینه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">فاسیولوزیس یک بیماری انگلی مشترک است که توسط ترماتود <em>فاسیولا هپاتیکا</em> ایجاد می‌شود. پروتئازها جهت بقا</span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">ی</span></span> <span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">انگل‌ها ضروری می‌باشند. هدف از این مطالعه جهت بررسی </span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">فعالیت </span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">و مطالعه اثرات </span></span><span dir="LTR">pH</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> و دما بر </span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">سرین پروتئاز و سیستئین پروتئاز در ترماتود <em>فاسیولا هپاتیکا</em> </span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">بود.</span></span><br> <strong><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">مواد و روش‌ کار</span></span></strong>: <span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">ترماتودهای بالغ <em>فاسیولا هپاتیکا</em> از کبد گاوهای کشتار شده در کشتارگاه شهرستان ارومیه جدا شدند و میزان پروتئین آن‌ها اندازه‌گیری شد. فعالیت پروتئولیتیک عصاره کرم بالغ با استفاده از سوبسترای آزوکازئین در محدوده </span></span><span dir="LTR">pH</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> 2 تا 12 </span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">موردبررسی قرار گرفت.</span></span> <span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">سوبسترای ویژه تریپسین، کیموتریپسین و کاتپسین </span></span><span dir="LTR">B</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> برای سنجش آنزیم‌های پروتئازی استفاده شد. </span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">اثر مهارکننده‌های پروتئازی پپساتین، </span></span><span dir="LTR">DTT</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">، </span></span><span dir="LTR">PMSF</span> <span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">و </span></span><span dir="LTR">EDTA</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> بر روی این آنزیم‌ها بررسی شد. برآورد دما و </span></span><span dir="LTR">pH</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> بهینه در محدوده دمایی 90-</span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">10 </span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">درجه سانتی‌گراد و 12-2 </span></span><span dir="LTR">pH</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> بود.</span></span><br> <strong><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">یافته‌ها</span></span></strong>: <span dir="LTR">pH</span> <span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">بهینه فعالیت برای تریپسین و کیموتریپسین قلیایی و فعالیت پروتئولیتیکی و کاتپسین </span></span><span dir="LTR">B</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> اسیدی بود. فعالیت سرین پروتئاز و سیستئین پروتئاز در<em> فاسیولا هپاتیکا</em> ثبت گردید. دمای بهینه برای فعالیت تریپسین و کیموتریپسین در 50 درجه سانتی‌گراد و کاتپسین </span></span><span dir="LTR">B</span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;"> در 40-30 درجه سانتی‌گراد بود. هر سه پروتئاز پایداری دمایی تا 40 درجه سانتی‌گراد را نشان دادند</span></span><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">.</span></span><br> <strong><span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">بحث و نتیجه‌گیری</span></span></strong>: <span style="font-family:nazanin;"><span style="font-size:9.5pt;">ثبات دمایی بالای پروتئازهای <em>فاسیولا هپاتیکا</em> نشان داد که به‌عنوان یک عامل بالقوه می‌توانند کاربردی زیستی در تهیه واکسن و داروهای ضد انگلی داشته باشند.</span></span><br> &nbsp; <a name="_Toc416081061"><strong><em>Background & Aims</em></strong></a>: Fascioliasis is a zoonotic disease caused by the trematode Fasciola hepatica. Proteases are essential for the survival of parasites. This study was conducted to evaluate the serine and cysteine proteases of F. hepatica and also to the investigate the effect of pH and temperature on proteases activity and their temperature stability.<br> <strong><em>Materials & Methods</em></strong>: Adult Fasciola were isolated from infected livers and their protein levels were measured. The total proteolytic activity of the extract of F. hepatica was evaluated using azocasein substrate in pH values from 2 to 12. Trypsin, chymotrypsin and cathepsin B substrates were used to measure protease activity. We evaluated the effect of protease inhibitors, PMSF, pepsin, DTT and EDTA on these enzymes. The estimation of optimum temperature and pH was performed within a temperature range of 10-90 &deg; C and at pH levels 2-12.<br> <strong><em>Results</em></strong>: The optimum pH activity of trypsin and chymotrypsin were recorded at an alkaline pH and total proteolytic activity and cathepsin B were recorded at an acidic pH. The results showed that F. hepatica had serine and cysteine protease activity. The optimum temperature activity for trypsin and chymotrypsin was 50 &deg; C. The optimum temperature activity for cathepsin B was at 30 to 40 &deg; C. The temperature stability for the three proteases was up to 40 &deg; C.<br> <strong><em>Conclusion</em></strong>: The high temperature stability of F. hepatica proteases showed that they could be used as a potential factor in biological applications such as vaccine and anti-parasitic drugs. فاسیولا هپاتیکا, سرین پروتئاز, سیستئین پروتئاز, pH, دما Fasciola hepatica, Cysteine protease, Serine protease, pH, Temperature 904 912 http://umj.umsu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-718-4&slc_lang=fa&sid=1 Leila Kianifard لیلا کیانی فرد leilakianifard@gmail.com 3700319475328460023127 3700319475328460023127 No PhD condidate of Parasitology, Department of Pathobiology, Parasitology Division, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran دکتری تخصصی انگل شناسی، گروه پاتوبیولوژی، بخش انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران Mohammad Yakhchali محمد یخچالی m.yakhchali@urmia.ac.ir 3700319475328460023128 3700319475328460023128 Yes Professor, Department of Pathobiology, Parasitology Division, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran (Corresponding Author ( استاد گروه پاتوبیولوژی، بخش انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران (نویسنده مسئول) Mehdi Imani مهدی ایمانی m.imani@urmia.ac.ir 3700319475328460023129 3700319475328460023129 No Associate Professor, Department of Basic Sciences, Biochemistry Division, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran دانشیار گروه علوم پایه، بخش بیوشیمی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران